Aísle su compuesto al instante con puriFlash® XS530 y el Espectrómetro de Masas Compacto expression® CMS
Original whitepaper:
MASS DIRECTED FRACTION COLLECTION BY REVERSE PHASE FLASH CHROMATOGRAPHY COUPLED TO THE EXPRESSION® CMS
Author: Advion Interchim Scientific
Introducción
En esta nota de aplicación, comparamos el uso de un sistema de cromatografía en columna con detector UV solo frente al mismo sistema combinado con un espectrómetro de masas. Los datos destacan el impacto en la eficiencia del flujo de trabajo y subrayan la importancia de seleccionar el divisor adecuado.
Instrumentación
Figura 1
Figura 2
Resumen
¡La Purificación Dirigida por Masa ya está disponible para nuestro sistema básico puriFlash® XS 530!
Con la Purificación Dirigida por Masa obtendrá sus compuestos puros más rápidamente y con menos pasos, ahorrando horas cada semana. Advion Interchim Scientific® ya ofrece la mejor integración PrepLC-MS de la industria y ahora también integra perfectamente nuestras soluciones de Purificación Flash.
Con puriFlash® XS 530 acoplado al Espectrómetro de Masas Compacto expression® (CMS), conseguirá:
✅ Precisión en la recolección: Capture solo los picos de interés.
✅ Flujo de trabajo optimizado: Reduzca o elimine la necesidad de análisis de fracciones con la confianza de haber recolectado el pico adecuado.
✅ Mayor eficiencia: Evite el evaporado de fracciones innecesarias.
Ultra Fácil, Ultra Rápido, Ultra Preciso
✅ Ultra Fácil:
Con Cromatografía Flash o Preparativa en Fase Normal o Inversa, comience a recolectar sus fracciones según su masa.
✅ Ultra Rápido:
Antes de la purificación, la muestra diluida puede inyectarse en el MSD, a través de la válvula de inyección directa, para visualizar la masa presente en el producto y registrarla en el método de purificación para su recolección.
✅ Ultra Preciso:
Puede confiar al 100% en puriFlash® MS. Pero si se quiere asegurar de que todo salió bien, simplemente pregunte: puriFlash® MS confirmará la masa y la pureza de las fracciones recolectadas.
Ejemplo #1: Purificación solo con señal UV
Advion Interchim Scientific® puriFlash® XS 530 con un detector UV únicamente (Figura 1) se utiliza para monitorear los compuestos que eluyen.
La detección UV se basa en la absorción de luz ultravioleta por compuestos que contienen grupos cromóforos. Estos grupos (como los dobles enlaces conjugados o los grupos aromáticos) absorben luz en longitudes de onda específicas.
Método
Configuración Experimental (Figura 3)
Sistema de cromatografía flash: puriFlash
Columna: puriFlash® Columna 15μm C18-HQ F0080 XS 530
Flujo: 34 mL/min
Detector: UV (200-400 nm)
Muestra: Mezcla de 1 mL (5 compuestos, 20 mg/mL cada uno)
Figura 3: El software puriFlash® InterSoft® X, mostrado aquí, controla todo el flujo de trabajo para la detección UV y la recolección de fracciones.
Resultados
Señal UV a 254 nm para la recolección
Los compuestos se recolectan en 15 tubos de 25 ml. Cada fracción recolectada será analizada por LC/MS (cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas) en otro laboratorio. El análisis por LC/MS después de la purificación mediante cromatografía flash es un paso clave para verificar la pureza e identidad de los compuestos aislados, pero requiere tiempo para la preparación y el análisis de las muestras.
Figura 4. Izquierda: detección y colección a UV a 254 nm. Derecha: Rack de colecta correspondiente a la purificación con señal UV
Ejemplo #2: Purificación con señal MS
Vamos a realizar la misma separación utilizando Advion Interchim Scientific® expression® CMS acoplado al sistema de cromatografía flash XS 530 (Figura 2) para la recolección de fracciones dirigida por masa.
Normalmente, un detector UV se utiliza para monitorear los compuestos que eluyen. Sin embargo, una limitación del detector UV es que depende de la presencia de un cromóforo en la estructura química del compuesto; por lo tanto, un analito de interés puede no ser detectable si carece de un cromóforo UV adecuado o si coeluye con otro compuesto.
Además, los sistemas de disolventes pueden interferir y dificultar la absorción UV. El CMS proporciona la máxima sensibilidad, identificando de manera inequívoca los materiales de partida residuales, los iones del producto deseado, los subproductos y las impurezas mediante su peso molecular, a pesar de la coelución de compuestos y los picos del disolvente.
Figura 2: Advion Interchim Scientific® expression® CMS (derecha) acoplado al sistema de cromatografía flash XS 530 (izquierda) via MS Splitter (centro)
Inyección FIA
Para identificar por masa nuestros compuestos de interés en la mezcla a purificar, realizaremos un análisis de inyección de flujo (FIA, Flow Injection Analysis). Para ello, diluiremos una parte de nuestra mezcla e introduciremos la muestra con una jeringa en el expression® CMS mediante la válvula de inyección frontal del sistema.
Con el software integrado puriFlash® InterSoft® X, los parámetros de la fuente de iones del espectrómetro de masas pueden programarse dentro de la misma interfaz. Se encuentran disponibles tanto ESI como APCI, en modos de ionización positiva o negativa. (Fig. 5.1 y 5.2).
Figura 5.1. Identificación de los compuestos de interés a m/z 222
Figura 5.2. Identificación de los compuestos de interés a m/z 372
Los m/z de interés se agregan directamente al método de purificación al hacer clic en la etiqueta para recolectar con estas señales m/z.
Método
Configuración Experimental (Figura 6)
- Sistema de Cromatografía Flash: puriFlash® XS 530 con detector UV (200-400 nm)
- Disolvente: Acetonitrilo + 0.1% de ácido fórmico
- Columna: puriFlash® Columna 15 μm C18-HQ F0080
- Espectrómetro de Masas: expression® CMS (34 mL/min)
- Divisor puriFlash MS: bomba de compensación 0.1 mL/min, bomba de dilución 0.5 mL/min, válvula 1.5 s
- Muestra: Mezcla de 1 mL (5 compuestos, 20 mg/mL cada uno)
Figura 6: El software puriFlash® InterSoft® X, mostrado aquí, controla todo el flujo de trabajo para la recolección de fracciones dirigida por masas, incluyendo la operación y la gestión de datos desde el espectrómetro de masas.
Figura 7: Parámetros de fuente APCI y divisor MS:
Los parámetros de la fuente iónica y del divisor MS están disponibles para programarse directamente en el panel del método.
La operación y la gestión de datos provienen del espectrómetro de masas.
Resultados
Señal UV a 254 nm para visualización y XIC de 2 compuestos para la recolección (Figuras 8.1 y 8.2):
Figura 8.1. Señales UV 254nm, XIC 371-374m/z, XIC 272-275m/z, XIC 220-224m/z
Figura 8.2. Señales XIC 371-374m/z, XIC 220-224m/z
La sincronización entre la señal UV y las señales de masa es perfecta, y los compuestos se recogen en solo 4 tubos de 25 ml (Figura 9).
Figura 9. Rack de colecta correspondiente a la purificación con señal MS
No es necesario realizar otro análisis, ya que la visualización del espectro de masas para cada pico está disponible directamente en el software ISX (Figura 10).
La recolección de fracciones dirigida por masas acelera significativamente el flujo de trabajo del químico, brindando confianza en el contenido y la pureza de las fracciones recolectadas al eliminar TLCs fuera de línea, procesos de trabajo adicionales y análisis LC/MS en laboratorios centrales.
Importancia del Divisor
MS Splitter vs Divisor Dinámico Estándar (Figura 11):
La misma purificación se ha realizado con una válvula de divisor dinámico estándar (la más común en el mercado). La sobrepresión generada por este divisor fue superior a 20 bares (presión máxima que puede soportar la columna), por lo que el sistema detectó una sobrepresión que no se puede resolver ni siquiera reduciendo la tasa de flujo.
Debido a esta presión de retroceso generada, se vuelve difícil o imposible trabajar con una columna flash con un caudal superior a 25 ml/min.
Gracias a la tecnología innovadora del divisor MS Splitter, no se genera ninguna contrapresión, incluso si el caudal es alto.
Es posible trabajar con todo tipo de dimensiones de columna y con todos los sistemas puriFlash® 5.
La post-dilución integrada en esta interfaz permite la inyección de muestras sin limitaciones de concentración y sin el riesgo de saturación del detector.
Conclusión
El alto caudal y el eluato altamente concentrado del sistema de Cromatografía Flash son muestreados de manera continua utilizando el MS Splitter, diluidos e introducidos al CMS utilizando un disolvente compatible con MS. La relación masa/carga (m/z) de cada compuesto se detecta y se correlaciona con los picos UV. Los dos productos objetivo se recolectan en base a un ion fragmento común. La accesibilidad y capacidad de los sistemas Advion Interchim Scientific® expression® CMS y puriFlash® hacen de estos instrumentos la elección preferida para los químicos sintéticos orgánicos y medicinales que desean una identificación definitiva de sus compuestos mientras optimizan las separaciones cromatográficas.
Cómo contactar con Cromlab
Para cualquier información adicional u oferta de productos contacte con nuestro Departamento Comercial.
Advion e Interchim se han unido recientemente. Obtenga más información sobre los beneficios de la espectrometría de masas combinada y la cromatografía Flash en su nota de prensa: https://www.advion.com/advion-interchim-combination/
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